蝴蝶兰试管苗继代及生根培养的研究-园林工程苗木种植技术

摘 要：以蝴蝶兰试管苗为试材进行了继代及生根培养基的研究，介绍了试验材料与方法，对试验结果进行了分析，通过两次试验对比得出结论：在蝴蝶兰的继代培养中３号培养基ＭＳ＋ＢＡ５ｍｇ/Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ/Ｌ＋活性炭１．５ｇ/Ｌ是最适合的；在生根培养中４号培养基ＭＳ＋ＮＡＡ１ｍｇ/Ｌ＋活性炭１．５ｇ/Ｌ是最好的。 关键词：蝴蝶兰；继代培养；生根培养；培养基蝴蝶兰（ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ）为兰科（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ）著名的盆栽观花植物。它清雅艳丽、花形如蝶、花期较长，具有很高的观赏价值，为热带兰中的珍品。 蝴蝶兰属单型茎的兰花，很少有侧芽萌发，靠自然无性繁殖，繁殖率极低，靠有性繁殖又因种子细小，不含为种子萌发提供营养的胚乳和其他组织，而且种子萌发还需要共生菌滋养，所以在自然条件下很难萌发。 近年来，随着人民物质文化生活的提高和东西方文化交流的加强，蝴蝶兰更受到人们的喜爱。只依靠传统的营养繁殖已经不能满足市场需求，而组织培养技术可以不受时间的限制进行周年生产，在不改变母本性的基础上还能去除病毒、真菌和细菌等病害，日益成为工厂化生产蝴蝶兰的主要手段。因此研究蝴蝶兰的组织培养及相关技术，对于我国花卉业的发展是非常有必要的。 在蝴蝶兰组织培养技术方面，国内外都有一定的研究。为了充分准备试验，笔者参考了国内外蝴蝶兰组织培养研究的现状，设计了这次试验，目的是研究ＭＳ培养基中不同浓度的激素（ＢＡ，ＮＡＡ）对于不同品种的蝴蝶兰继代及生根培养的影响，最终找出一个最佳培养基。 １材料与方法 １．１材料 沈阳农业大学园林花卉实验室提供的无菌试管苗。 １．２材料准备 由于所提供的试管苗的数量有限，无法满足试验需要，所以在１月２３日对现有的试管苗进行继代、扩繁。 １．２．１培养基的制备 经过４０天的培养，无菌试管苗的数量已满足需要，准备进入正式试验阶段。为了方便比较、选择，第一次试验配制了３个继代培养基，每个配方中的激素比（ＢＡ/ＮＡＡ）分别为１００，５０，１０，并依次编号为１号、２号、３号；一个生根培养基编号为４号。各配方中均加入蔗糖３０ｇ/Ｌ、琼脂６．５ｇ/Ｌ、活性炭１．５ｇ/Ｌ，ｐＨ值为６．２。第二次试验也配制了３个继代培养基，每个配方中的激素比都是１０，并且沿用第一次试验中的３号培养基，依次编号为５（３）号、６号、７号，一个生根培养基为８号，除８号培养基不加活性炭外，其他都和第一次试验一样。 首先，称取蔗糖３０ｇ、琼脂６．５ｇ、活性炭１．５ｇ各４份，通过计算量取每个配方所需药品，分别倒入编好号的广口瓶中。将蔗糖和琼脂各一份放入一大烧杯，加入７００ｍＬ～８００ｍＬ蒸馏水，开始加热并不停地搅拌，等到琼脂完全溶解，烧杯内再无其他杂物时，停止加热。稍后加入一份量好的母液和激素并用蒸馏水洗３～５次倒入大烧杯，然后用蒸馏水定容并搅动再用ｐＨ试纸调ｐＨ值为６．２，最后加入一份活性炭搅拌均匀，准备分装。其他培养基也如此配制，每瓶倒入１ｃｍ深的培养基后进行封口。现把两次试验所用培养基配方列举如下： １号：ＭＳ＋ＢＡ５ｍｇ/Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ/Ｌ＋活性炭１．５ｇ/Ｌ； ２号：ＭＳ＋ＢＡ５ｍｇ/Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ/Ｌ＋活性炭１．５ｇ/Ｌ； ３（５）号：ＭＳ＋ＢＡ５ｍｇ/Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ/Ｌ＋活性炭１．５ｇ/Ｌ； ４号：ＭＳ＋ＮＡＡ0.1ｍｇ/Ｌ＋活性炭１．５ｇ/Ｌ； ６号：ＭＳ＋BＡ0.1ｍｇ/Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ/Ｌ＋活性炭１．５ｇ/Ｌ； ７号：ＭＳ＋ＢＡ０．５ｍｇ/Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ/Ｌ＋活性炭１．５ｇ/Ｌ； ８号：ＭＳ＋ＮＡＡ１ｍｇ/Ｌ。 １．２．２培养及接种所需器具的准备 将分装封口后的培养基放入高压灭菌锅，在１２１℃～１２２℃高温下压１５ｍｉｎ～２０ｍｉｎ，取出培养基，在其未完全冷却前轻轻晃动使活性炭在培养基中分布均匀。再将试验要用的镊子、刀、培养皿等工具用牛皮纸包好放入高压锅，在１２６℃高温下压３０ｍｉｎ以上。之后将凉了的培养基和工具用托盘放到无菌接种室，把要转接的无菌试管苗也放入无菌接种室，打开紫外灯关好门窗，２ｈ～３ｈ之后可以关闭紫外灯并打开超净工作台的风扇，１５ｍｉｎ～２０ｍｉｎ后方可入内。然后在超净工作台上进行无菌转接。将原球茎转接到继代培养基中，每瓶５棵，将强壮的小苗接到生根培养基上，每瓶５棵。将转接完的瓶用封口膜封好，切勿用手碰到瓶沿，封完的瓶写上标号就可以放在培养架上进行培养了。 １．２．３培养条件 将转接好的瓶放到培养架上，培养温度２５℃～２８℃，光照强度８００Ｌｘ～２００Ｌｘ，照明每天１２ｈ～１６ｈ。 ２结果与分析 ２．１蝴蝶兰继代培养的研究 ２．１．１不同培养基对蝴蝶兰继代培养的影响 ２．１．１．１不同培养基对２号蝴蝶兰继代培养的影响 把２号蝴蝶兰品种转接在试验1中的３种继代培养基上，每瓶接５个，经过４０天的培养后调查其生长情况，见表１。 ２号蝴蝶兰在试验1中原球茎的增殖率在３号培养基上表现最好，其次为１号、２号。但成苗数在１号培养基中要多一些。分析其原因是由于３号培养基中激素浓度比为１０，比较适合蝴蝶兰原球茎的增殖。在１号培养基中激素浓度比为１００，细胞分裂素（ＢＡ）起主导作用诱导芽的分化，使成苗数量增加。 为了进一步试验３号培养基，在试验2中沿用了３号培养基并保持其激素浓度比不变（ＢＡ/ＮＡＡ＝１０）。另外配制了两种培养基，分别编号为５（３）、６、７号。将２号品种转接到５（３）、６、７号培养基中，每瓶接５个。培养４０天后进行调查，其生长情况见表２。 从表２可以看出，５（３）号继代培养基在试验２中原球茎增殖率可高达１１２％，从数据上看６号、７号培养基的原球茎增殖率也略高于１号、２号培养基，但成苗率没有试验１的效果明显。分析其原因是因为试验２中的激素比都是１０，细胞分裂素起不到主导作用，成苗量相对减少。由于培养苗的体内积存了一部分激素，使实际的激素浓度略高，从而使原球茎增殖量增高。 ２．１．１．２不同培养基对３号蝴蝶兰继代培养的影响 把３号蝴蝶兰品种转接到试验１中的３种继代培养基上，每瓶接５个。经过４０天培养后对其进行调查分析，结果见表３。 由表３可见，在试验１中３号蝴蝶兰在３号培养基中的原球茎增殖率最高，为１３６．８％，其次是１号培养基，为５０％，在２号培养基中的球茎增殖率最小只有３２％。成苗率是在１号培养基中最大，为５２．６％。分析其原因是由于３号培养基中的激素比为１０，适合原球茎增殖，激素比（ＢＡ/ＮＡＡ）在一定范围内越大越有利于芽的分化。所以在１号培养基中成苗率较高。 在试验２中把３号品种转接到继代培养基５（３）号、６号、７号，每瓶接５个，培养４０天后对其进行调查，生长情况见表４。 由表４可以看出，５（３）号培养基对３号品种的球茎增殖很适合，增殖率为１３３％。尽管５号、６号、７号培养基中的激素比都是１０，但６号、７号培养基中的激素含量少，原球茎增殖的效果不如５号培养基明显，而且由于细胞分裂素（ＢＡ）在配方中起不到主导作用，所以３种培养基的成苗效果都不好。 ２．１．２同一培养基对不同蝴蝶兰继代培养的影响 ２．１．２．１试验１中培养基对不同蝴蝶兰继代培养的影响 为了更好地比较蝴蝶兰品种间的差异，在第一次试验中把２号、３号蝴蝶兰转接到３种培养基上，并摆放到同一培养架进行对比调查，其生长情况见表５。 由表５可以看出，１号培养基对两个蝴蝶兰品种所产生的影响各有不同，球茎增殖分别为６４．８％和５０％，但成苗率较好为８６．９％和５２．６％。对２号品种的原球茎增殖和成苗情况比对３号的要好。这主要是因为１号培养基中细胞分裂素（ＢＡ）占主导地位，促使苗生长，而且２号、３号品种间也存在着差异。２号培养基没有大的激素比（ＢＡ/ＮＡＡ）诱导芽的分化，也不适合原球茎的增殖。３号培养基对于两个品种的原球茎增殖都很有效果，增殖率分别为１２９．７％和１３６．８％。 ２．１．２．２试验２中培养基对不同蝴蝶兰继代培养的影响 为了找出一种最适合的继代培养基配方，设计了试验２。配方５（３）号、６号、７号中的激素比（ＢＡ/ＮＡＡ）不变，将２号、３号蝴蝶兰转接到这３个培养基上，每瓶接５个。然后对比培养，４０天后调查结果，见表６。 由表６可以看出，试验２的结果也证实了３号继代培养基适合于两个品种的蝴蝶兰。６号、７号培养基的激素含量明显少了许多，但是效果并不是明显低于试验１。分析原因是因为在试管苗体内已经积存了一部分激素，使实际激素含量略高。 ２．２蝴蝶兰壮苗生根培养基的研究 ２．２．１不同培养基对２号蝴蝶兰壮苗生根的影响 将２号品种中的成苗转接到４号、８号生根培养基上，培养４０天之后对其进行调查，结果见表７。 由表７可以看出，４号生根培养基中加有活性炭粉，使培养基适合根的生长，生根率达到了９６％，而且苗的长势也很好。在８号生根培养基中由于没有加入活性炭，不能为根的生长提供适合的生长环境，所以生根率只有２６．７％。 ２．２．２不同培养基对３号蝴蝶兰的影响 把３号蝴蝶兰的成苗转接到生根培养基中，每瓶接５棵。培养４０天以后调查其生长结果，见表８。 由表８可知，３号品种的生根率在两种培养基中均比２号品种要小，这主要是由于种间差异所致。４号加活性炭的培养基中的根长得很健壮，每株都有３～５条根且以后生长也很好，８号培养基中没有加活性炭，根长得很短，每株上只有１～２条根。 ３结论与建议 ３．１结论 在蝴蝶兰试管苗继代和生根培养的试验中我们经过实际的对比、选择得出了以下结论： （１）３号培养基是最适合于蝴蝶兰继代培养的培养基。 （２）在壮苗生根的培养基中，加有活性炭的培养基更有利于苗的生长，而且在以后的培养中也是加活性炭的长势较好。 （３）在成苗培养中，激素浓度比（ＢＡ/ＮＡＡ）在一定范围内越大越有利于诱导芽的分化，越有利于成苗。 ３．２建议 （１）ＭＳ作为基本培养基，因其含有大量的营养物质能提供给培养物质快速生长所需的养分，所以在继代培养中增殖率和成苗率都很高。在以后的蝴蝶兰组培中采用ＭＳ为基本培养基。 （２）在继代培养的过程中，尝试在培养基中加入果汁，可以有效提高原球茎的诱导率，加快繁殖速度。 （３）在蝴蝶兰继代培养中，切块细小、分布稀疏的培养瓶内群体生长较慢，而切块大、分布密集的培养瓶内群体生长十分旺盛。培养时在每个瓶中多接几个培养苗，形成群体效应更有利于生长。 参考文献 ［１］张秀珊．蝴蝶兰组培苗栽培技术［Ｊ］．中国花卉园艺，２０００（２）：２８－２９． ［２］王怀宇．蝴蝶兰快速无性繁殖［Ｊ］．广东园艺学报，１９８９，１６（１）：７３－７７． ［３］傅连芳．蝴蝶兰的快速繁殖［Ｊ］．热带作物研究，１９９０（２）：２４－２７． ［４］李进进，廖俊杰，柯丽婉，等．蝴蝶兰根段组织培养［Ｊ］．植物生理学通讯，２０００，３６（１）：３７． ［５］杨美纯，周岐伟，许鸿源，等．外部因子对蝴蝶兰叶片原球茎状体发生的影响［Ｊ］．广西植物，２０００（１）：４２－４６． ［６］张秀清，王志武，王春英．蝴蝶兰实生苗原球茎状体诱导研究［Ｊ］．莱阳农学院报，１９９５，１２（１）：４４－４６． ［７］郭达初，刘克斌，柴明良．蝴蝶石斛兰、卡特兰、蝴蝶兰离体快繁［Ｊ］．浙江农业学报，１９９１，３（１）：３４－３８． 第一作者简介：朱红华，男，１９７８年７月生，２００２年毕业于沈阳农业大学园林系，助教，辽宁省林业职业技术学院，辽宁省沈阳市苏家屯区枫杨路１８６号，１１０１０１。