猪瘟的临床诊断与实验室诊断

猪瘟（classicalswinefever，CSF），又称“烂肠瘟”，是由猪瘟病毒引起的猪的一种热性、致死性、高度接触性传染病，对养猪业影响颇大。1984年，国际兽疫局（OIE）将其列入A类传染病，我国目前将其定为一类传染病。

根据多年的流行病学研究和文献资料表明，大、中型养猪场通过科学而有效的免疫接种程序所建立的猪群，在猪瘟流行时只引起猪瘟的散发。尽管实行科学的防疫制度，包括疫苗提高药量，但没有完全扑杀带毒猪，某些养猪场就成为猪瘟的疫源地。因此，要不断地学习和研究预防猪瘟科学的措施、方法，主要环节是提高防疫措施、诊断、接种后的免疫预防和评价。对此，养猪场迫切需要及时诊断猪瘟和定期检疫猪瘟，只有快速、灵敏、准确、便捷的临床与实验室诊断，有利于有效地控制和扑灭猪瘟，从而保护养猪业。

1临床诊断

猪体温变化明显，迅速上升到41℃，少数达到42℃，稽留不退。食欲不振，其特征为病猪把嘴放在食物处片刻，又回到休息处。精神萎顿，伏卧嗜睡，后肢无力。先便秘后腹泻，以后交替发生，粪便中混有粘液或血丝。后期部分病猪有尿血、气喘等症状。急性结膜炎流出粘液或脓性分泌物，有些上、下眼睑粘在一起。常在鼻端、耳、四肢内侧、腹下有出血斑和出血点，指压不褪色。个别猪有神经症状：磨牙、痉挛、脚交叉、站立不稳。先天性猪瘟病毒感染可造成流产、木乃伊胎、畸形、死胎、有震颤症状的弱仔猪出生、或外观正常但生产出被感染的仔猪。

全身性出血，皮肤、粘膜、实质器官都有充血和大小不等的出血点。淋巴结外观充血肿胀，切面周边出血，呈红白相间的“大理石样”。脾脏不肿大，边缘发现楔状梗死区。肾皮质色泽变淡，有点状出血。膀胱粘膜表现不同程度的充血，粘膜上有针尖大小的出血点。扁桃体出现梗死，随着细菌侵入发生化脓性炎症。肠道有不同程度的充血和出血，回盲瓣、回肠、结肠可见轮层状溃疡即“扣状肿”。公猪包皮积尿。

根据以上临床症状、特征性病理变化，可以建立猪瘟的初步诊断，但应与猪丹毒、猪副伤寒、猪肺疫、猪弓形体和链球菌病等进行鉴别。

2实验室诊断

根据临床症状、特征性病理变化，建立猪瘟的初步诊断，但确诊、非典型猪瘟，特别是仔猪表现的复杂症状，难以做出诊断，必须借助实验室诊断进行确诊，现在实验室诊断应用方法有动物试验、病毒分离、免疫荧光试验等。

2.1动物试验

取病猪的扁桃体、脾脏、肾脏、淋巴结等组织（扁桃体是分离病毒首选器官，如采集不到扁桃体，也可采集脾脏、肾脏、淋巴结），剪碎、研磨，加生理盐水制成乳剂，无菌处理后接种易感猪，观察发病情况，然后分离病毒。中国兽医药品监察所建立用家兔代替易感猪诊断猪瘟试验（兔体免疫交叉试验），将病料乳剂接种健康家兔，7d用兔化猪瘟弱毒注射家兔，24h后每6h测温1次，连续3d。无定型热反应，说明病料中含有猪瘟病毒。

2.2病毒分离

取病猪的扁桃体、脾脏、肾脏、淋巴结组织，加双抗后磨成乳剂，过滤、离心后取上清液，接种PK-15、PK-2a、ST等细胞进行病毒分离。Moormann等用SK-6细胞培养克隆化的猪瘟病毒，获得高效价的猪瘟病毒，并提取猪瘟病毒的RNA，建立猪瘟病毒的cDNA文库，完成Alfort株、Brescia株的全基因序列分析。

2.3免疫荧光试验

用冰冻切片或细胞触压片进行直接或间接荧光抗体染色，也可先将病料乳剂接种于细胞培养后，再用荧光抗体检测感染细胞，能直接检出感染细胞中的病毒抗原。此法方便快速、检出率高，许多国家将它作为执行猪瘟消灭计划的法定诊断试验。

2.4血清中和试验

可以检测出猪体内的抗体，目前最常用方法是免疫荧光中和试验、PAV株中和试验。邵振华等利用免疫荧光中和试验，对70日龄65份、5～6日龄34份、7月龄44份的猪瘟非免疫血清进行猪瘟母源抗体检测，结果70日龄阳性率52.3%，到5～6月龄全部转为阴性。

2.5间接血凝试验

操作简单，易制定，既可检测抗原，也可检测抗体，主要是监测猪瘟免疫抗体水平。李树春等将猪瘟兔化弱毒株细胞培养物浓缩纯化，致敏由戊二醛鞣酸处理的健康绵羊红细胞，制成冻干猪瘟间接血凝诊断液，用以检测血清中的猪瘟抗体效价。

2.6骨髓细胞学检查法

病初取病猪胸骨的骨髓浆汁做成涂片，姬姆萨染色后镜检，出现副淋巴母细胞，确定病猪感染猪瘟病毒。

2.7酶联免疫吸附试验（ELISA）

酶免疫分析技术是继荧光技术后发展起来又一先进诊断技术，其基本原理是特异性反应系统、间接放大系统和显示系统结合起来，用于检测抗体或抗原的一种免疫方法。Shannon等报道，在猪瘟感染前病毒血症产生时，采其血清进行ELISA检测猪瘟病毒，可做早期诊断，捕获ELISA能够检测2种不同猪瘟病毒株感染的病猪的血液和组织中的抗体。

2.8核酸探针杂交试验

核酸探针技术以病毒RNA基因组为模板制备探针，在cDNA合成后进行Southern-blotting。这种方法特异性强、准确可靠，可用于不同毒株的分离和鉴定。Cruliere等、Dable等、Colijin等利用猪瘟病毒基因组RNA构建cDNA，与牛病毒性腹泻病毒进行序列分析，合成36个探针，按照它们在病毒基因组的位置，根据特异杂交带区别猪瘟病毒、牛病毒性腹泻病毒以及绵羊边界病病毒。

2.9反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）

是以病毒RNA为模板进行反转录，再以PCR进行核酸扩增来检测猪瘟病毒。罗廷荣等应用RT-PCR对猪瘟诊断表明，RT-PCR技术可应用于临床诊断。Sand-Vik等和Glodrick等分别利用此法对猪瘟病毒进行检测，结果显示此法具有检出率高、特异性强，微量病料即可诊断，且具有生物安全性，无散毒的危险。